本期導(dǎo)讀：IHC（Immunohistochemistry, 免疫組織化學(xué)）是用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）對(duì)組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測(cè)的技術(shù)。IHC實(shí)驗(yàn)中保護(hù)組織的兩種主要方法是對(duì)組織進(jìn)行石蠟包埋和冰凍，其中石蠟包埋是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法。

石蠟包埋對(duì)于組織形態(tài)保存完好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長(zhǎng)期存檔，供回顧性研究。實(shí)驗(yàn)組織保護(hù)的質(zhì)量是保證病理報(bào)告準(zhǔn)確性的重要環(huán)節(jié)。

本期將介紹石蠟包埋過程中容易忽略，但對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響很大的實(shí)操注意點(diǎn)。

常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個(gè)基本步驟：固定，脫水，透明，浸蠟和包埋。

1、固定

取新鮮組織浸泡在4%多聚甲醛或10%福爾馬林溶液中固定24-48h。固定完后自來水沖洗五次，各30min。

① 組織離體后應(yīng)在30min之內(nèi)固定。

② 固定液容積應(yīng)為組織的5-10倍，固定時(shí)間根據(jù)組織大小而定，固定時(shí)間過長(zhǎng)，修復(fù)后抗原暴露不完全；時(shí)間過短則固定不充分。

③ 脫水機(jī)內(nèi)固定液必須及時(shí)更換。

④ 固定后應(yīng)水洗，否則易造成脫片和染色不新鮮，也不利于蠟塊內(nèi)抗原、基因的保存。

組織經(jīng)過50%、70%、85%、95%的梯度酒精各30min，無水乙醇兩次，每次30min完成脫水。

Tips：

① 未經(jīng)充分固定的組織不得進(jìn)去脫水步驟。固定、脫水溫度不得超過37℃。

② 用于脫水的試劑容積應(yīng)為組織總體積的5-10倍以上。

③ 由低向高濃度酒精脫水，級(jí)差越小越好，

④ 量大或條件允許，可將大小組織分開脫水，較大組織塊脫水時(shí)間長(zhǎng)與較小者。

⑤ 組織至于無水乙醇內(nèi)的時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以免硬化。

3、透明

分別經(jīng)過無水乙醇：二甲苯、二甲苯（Ⅰ）（根據(jù)組織透明度，可減少或增加第二遍二甲苯透明的時(shí)間）、二甲苯（Ⅱ）各30min。

Tips：

① 二甲苯的容積應(yīng)為組織總體積的5-10倍以上。

② 透明度時(shí)間適宜，依不同種類組織及其大小而異（子宮肌瘤、食管等堅(jiān)硬組織延長(zhǎng)；肝臟，小組織縮短）組織呈現(xiàn)棕黃或暗紅色透明即可。

③ 二甲苯應(yīng)及時(shí)過濾、更換。

4、浸蠟

蠟Ⅰ，蠟Ⅱ各30min.

Tips：

石蠟溫度控制在58-62℃，高于熔點(diǎn)2℃為佳。

將金屬托放入熔化的石蠟，再放入組織，冷固待石蠟?zāi)獭?

Tips：

① 防止各種異物組織包入蠟塊內(nèi)。

② 包埋應(yīng)先放石蠟后放組織，速度盡可能快，以免凝固。

③ 包埋用熔蠟應(yīng)純凈，熔點(diǎn)與浸蠟的相近。

④ 包埋時(shí)不得使用明火，以防點(diǎn)燃，鑷子不可溫度過高，以免燙傷組織。

⑤ 包一個(gè)換一把鑷子，防止污染。

⑥ 囊壁、管腔豎直包埋，所需切面向下包埋；扭曲組織正后包埋；多個(gè)小組織可以包在一個(gè)面。

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《IHC/IF/ICC實(shí)驗(yàn)方案流程圖及所需試劑》