知識要點(diǎn)：熒光標(biāo)記的流式抗體種類繁多，熒光素的激發(fā)光譜與發(fā)射光譜各異，給抗體選擇、熒光搭配等帶來了諸多困擾。需要注意：熒光素的激發(fā)波長需要與可激發(fā)發(fā)光的激光器匹配，熒光素的激發(fā)光譜峰值盡可能接近儀器激光的激發(fā)光波長。此外，熒光素的激發(fā)波長必須選用相應(yīng)波段檢測器接收，以達(dá)到同時(shí)檢測的目的。
熒光素的搭配依據(jù)
流式抗體熒光標(biāo)記搭配主要由3個(gè)因素決定：流式細(xì)胞儀檢測的通道數(shù)、需要同時(shí)檢測的熒光抗體數(shù)、廠家抗體的熒光種類及數(shù)目。
（2） 需要同時(shí)檢測的指標(biāo)數(shù)量超過了儀器能力范圍：拆開分管標(biāo)記。如下例，
計(jì)劃檢測5個(gè)指標(biāo)，而流式細(xì)胞儀只有4個(gè)通道，首先將指標(biāo)歸成2類，再將樣本分成2份，分別檢測。如同時(shí)檢測CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么將樣本分成兩份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
4色以內(nèi)流式分析熒光素抗體組合
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PerCP |
FITC、PE |
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PE-Cy5 |
FITC、PE |
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PE-Cy5.5 |
FITC、PE、APC |
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PE-Cy7 |
FITC、PE、APC |
6色、8色、10色流式分析熒光素抗體組合
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6色 |
8色 |
10色 |
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FITC或Alexa Fluor 488 |
FITC FITC 或Alexa Fluor 488 |
FITC或Alexa Fluor 488 |
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PE |
PE |
PE |
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PE-Texas Red或PE- Alexa Fluor610 |
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PerCP-Cy5.5 |
PerCP-Cy5.5 |
PerCP-Cy5.5 |
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PE-Cy7 |
PE-Cy7 |
PE-Cy7 |
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APC或Alexa Fluor647 |
APC 或 Alexa Fluor647 |
APC 或 Alexa Fluor647 |
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APC或Alexa Fluor680或Alexa Fluor700 |
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APC-Cy7或APC-H7 |
APC-Cy7或APC-H7 |
APC-Cy7或APC-H7 |
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AmCyan或BD Horizon V500 |
AmCyan或BD Horizon V500 |
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BD Horizon V450 |
BD Horizon V450 |
