文章信息
期刊：ACS nano
影響因子(IF)：13.903
文章名稱：Overcoming the Reticuloendothelial System
Barrier to Drug Delivery with a “Don’t-Eat-Us”
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作者：唐宜軒博士
作者單位：西南大學
引用抗體：anti-F4/80｜bs-11182R
anti-ZO-1｜bs-1329R
anti-Claudin5｜bs-10296R
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/AF488｜bs-0295G-AF488
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/HRP｜bs-0295G-HRP
Donkey anti-rabbit IgG/APC｜bs-0295D-APC
文章摘要
制劑的長循環(huán)遞送是提高藥物在靶部位累積及療效的重要前提。因此，富含巨噬細胞的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）成為了納米藥物臨床開發(fā)的重要挑戰(zhàn)。為了克服該阻礙，基于CD47蛋白與巨噬細胞表面受體SIRPα蛋白互作后激發(fā)“don’t-eat-me”信號通路能夠抑制巨噬細胞的吞噬作用，我們開發(fā)了一種新型的特異性的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）封閉策略。該策略采用少量的多肽脂質(zhì)體可實現(xiàn)對RES的長期特異性封閉。首先，我們設計了一種CD47蛋白衍生的耐酶解的D型Self肽（DS），并將其標記在脂質(zhì)體上（DSL）。靜脈給藥后，DSL進入體內(nèi)后會快速與吞噬細胞作用。而DS與SIRPα的互作使DSL能夠長期抑制巨噬細胞的吞噬能力，使后續(xù)注射的納米制劑可以避免被巨噬細胞識別。該策略為長循環(huán)遞藥研究提供了新的思路，并且因為無需對遞送系統(tǒng)進行額外化學修飾，該策略可與各類靶向遞藥系統(tǒng)聯(lián)用， 因此具有廣泛的應用前景。
文中采用了Bioss公司的F4/80抗體（bs-11182R）、ZO-1抗體（bs-1329R）和Claudin5抗體（bs-10296R）對肝駐留巨噬細胞、脾巨噬細胞以及腦微血管內(nèi)皮細胞進行一抗標記，并分別采用了Alexa Fluor 488及CY3標記二抗進行熒光標記。進而使作者可以順利對納米制劑和吞噬細胞進行共定位成像分析，為文章結(jié)論提供了支撐。
圖1. 預注射DSL可提高PLGA NPs在體內(nèi)的循環(huán)時間。（a）PLGA NPs的體內(nèi)和（b）體外熒光成像。（c）血液中DiD藥-時曲線及（d）消除半衰期和（e）AUC，* p <0.05，** p < 0.01，*** p <0.001; NS表示不顯著；數(shù)據(jù)結(jié)果顯示為mean± SD（n = 3）。（f）PLGA NPs和巨噬細胞/肝竇內(nèi)皮細胞的熒光共定位成像。巨噬細胞以F4 / 80（綠色）標記，肝竇內(nèi)皮細胞用CD31（卡其色）染色，PLGA NPs顯示為紅色，比例尺= 20μm。
圖2. 脂質(zhì)體和庫普弗細胞（KCs）/肝竇內(nèi)皮細胞（LSECs）的免疫熒光共定位。脂質(zhì)體注射24h后的肝臟切片。（a）庫普弗細胞以F4 / 80（綠色）標記，（b）肝竇內(nèi)皮細胞以CD31（綠色）標記，脂質(zhì)體以 Liss rhod PE EPC （紅色）標記。
圖3. bEnd.3 細胞中ZO-1及claudin 5的亞細胞定位。細胞在蓋玻片上孵育10天，用4%PFA固定并用0.1%TritonX-100處理后，細胞分別用ZO-1抗體（1:100）和Claudin5抗體（1:100）進行染色，然后使用Alexa Fluor488 二抗孵育。DAPI（5μg/mL）染色5分鐘后HCS觀察。
（感謝唐宜軒博士和《ACS NANO》提供素材！侵刪?。?/span>
Bioss相關抗體
CD31 bs-0195R 
交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
產(chǎn)品應用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg/Test
應用: Western Blot 應用: Flow cytometry
樣本: Human U937 樣本: Human HL60
稀釋度: 1/300 稀釋度: 3μg/1x106 cells
SIRPα bs-2708R
交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse
產(chǎn)品應用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg /test
應用: Western Blot 應用: Flow cytometry
樣本: Mouse Spleen&Bone 樣本: Human U937
稀釋度: 1/300 稀釋度: 3μg/1x106 cells
